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多肽的结构分析方法:质谱、核磁共振、红外光谱、紫外光谱、圆二色谱、X射线晶体学

发布时间:2023-12-12 分享至:

由氨基酸组成的多肽数目惊人,情况十分复杂,由100个氨基酸聚合成线形分子,可能形成20100种多肽。仅由Gly、Val、Leu三种氨基酸就可组成六种三肽。因此,多肽结构的确定,尤其是长链多肽结构的确定是一个相当重要也相当复杂的工作。纯的、单一的多肽是保证肽结构确证的前提条件。杭州专肽生物可对多肽提供1-5种检测报告。

多肽的结构分析方法

(一) 质谱

经典的多肽测序方法包括N末端序列测定的化学方法,如 Edman法、C末端酶解方法及C末端化学降解法等,这些方法都存在一定缺陷。例如作为多肽和蛋白质序列测定标准方法的N末端氨基酸苯异硫氰酸酯( phenylisothiocyanate,PITC)分析法(即 Edman法,又称PTH法),测序速度较慢(每天50个氨基酸残基);样品用量较大(nmol级或几十pmol级);对样品纯度要求很高;对修饰氨基酸残基往往会产生错误识别,而对N末端保护的肽链则无法测序。C末端化学降解测序法则由于无法找到PITC这样理想的化学探针,仍面临着很大的困难。在这种背景下,质谱( mass spectrometry,MS)由于具有较高的灵敏度、准确性、易操作性而备受关MS用于多肽序列测定时,灵敏度及准确性随分子量增大而明显降低,所以采用MS进行多肽序列分析比蛋白质简单,许多研究均是以多肽作为分析对象。近年来随着电喷雾电离质谱( electrospray ionisation,ES)及基质辅助激光解吸质谱( matrix assisted laser desorption/ Ionization,MALD)等质谱软电离技术的发展与完善,使极性大分子多肽的分析成为可能,检测限可达fmol级,可测定的分子量范围则高达100kDa。目前MALD已成为测定生物大分子尤其是蛋白质、多肽分子量和一级结构的有效工具。