生物素又称维生素H、辅酶R，是水溶性维生素，也属于维生素B族，B7。它是合成维生素C的必要物质，是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。

一、实验前处理

实验前玻璃器皿的处理

使用前将玻璃器皿进行洗刷。用活性剂，如月桂基磺酸钠或家用洗涤剂加入到洗涤用水中即可，对硬玻璃测定管及其他必要的玻璃器皿进行清洗，清洗之后200℃干热2h后方可使用。

二.实验前样品的处理

1.试验试剂的配制

生物素测定试验会用到很多试剂均需要提前准备，包括50%乙醇溶液、0.5mol/L氢氧化钠溶液、0.85%氯化钠溶液、1mol/L盐酸溶液、柠檬酸盐缓冲液（pH4.5）、蛋白酶-淀粉酶液、3%硫酸溶液。这些试剂按照国标上的要求和成分自行配制即可，其中蛋白酶-淀粉酶液需要现配现用。

2. 实验前培养基配制

培养基可购买商品化脱水合成培养基，也可以购买培养基成分自行配制。生物素测定的3种培养基分别是：乳酸杆菌琼脂培养基、乳酸杆菌肉汤培养基和生物素测定用培养基。前两种都涉及标准菌种活化，所以需要提前配制。用天平称取一定量干粉培养基，加入适量番茄汁和蒸馏水，电炉/微波炉煮沸，分装试管，121℃高压灭菌15min，备用。乳酸杆菌琼脂培养基需摆成斜面。

三、标准溶液的配制

1.配制生物素标准储备液

浓度100μg/mL，标准品要求纯度≥99%。用天平称取100mg 生物素标准品，置于烧杯中，用50%乙醇溶液溶解后转移至1000mL称量瓶中，烧杯用50%乙醇溶液清洗三次，清洗液均加入容量瓶，避免烧杯中有生物素残留，定容至刻度。可存储于棕色瓶中，于2-4℃冰箱保存12个月。 

2. 配制生物素标准中间液

生物素标准中间液浓度1.0μg/mL，准确吸取1mL生物素标准储备液置于100mL棕色容量瓶中，用50%乙醇溶液稀释并定容至刻度，混匀后储存于瓶中2-4℃冰箱，可保存6个月。

3. 配制生物素标准工作液

生物素标准工作液浓度10.0ng/mL，准确吸取1mL生物素标准中间液置于100mL棕色容量瓶中，用水稀释，定容至刻度，混匀，临用前现配。

4. 配制标准使用工作液

生物素标准使用工作液，高浓度溶液为0.2ng/mL和低浓度溶液为0.1ng/mL。从标准工作液中吸取两次各5mL，分别加入一个250mL容量瓶和一个500mL容量瓶，分别用水定容到250mL和500mL即可。